1、1仪器与试药1.1仪器RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂),SHB-Ⅲ循环式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司),UV-2100分光光度计(日本岛津)。
2、1.2试剂与材料芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,批号733-9203),其它试剂均为分析纯,沙棘叶(购自青海省海南州,经甘肃省药品检验所宋平顺主任药师鉴定)。
3、2方法与结果。2.1对照品储备液精密称取干燥至恒重的芦丁对照品10.2mg,置于50mL容量瓶中,用30%乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为204μg/mL的对照品储备液。
4、2.2标准曲线制备精密吸取1、2、3、4、5、6mL芦丁对照品溶液,分别置25mL容量瓶中,各加30%乙醇至6.0mL,加1%亚硝酸钠1mL,摇匀,放置6m in,再加10%硝啬地陆锾酸铝溶液1mL,摇匀,放置6m in。加4%氢氧化钠10mL,再加30%乙醇至刻度,摇匀,放置15m in,以相应试剂为空白,在500 nm的波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线(见图2-1)。计算回归方程为:A=10.287C+0·0035,(R=0.9997)线形范围为:8~49μg/mL。
5、2.3沙棘叶中总黄酮平均含量的测定取本品粗粉约2g,精密称定,按中国药典05版沙棘含量测定项下测定总黄酮的含量,计算式为:黄酮含量(%)=〔(样品相当于标准芦丁的浓度)〕×200×25/〔样品重(g)×1000〕×100%,重复测定2次,总黄酮的含量分别为1.55%、1.60%,平均值为1.57%。
6、2.4沙棘叶中总黄酮提取率的测定取本品粗粉约2g,精密称定,按要求加入提取剂,在一定温度下提取一定时间,趁热过滤,滤渣再提取一次,合并滤液,用相应提取剂定容于100mL容量瓶中,其余按中国药典05版沙棘含量测定项下操作,计算总黄酮含量,然后再计算总黄酮提取率,计算式为:提取率(%)=提取黄酮含量/沙棘叶中总黄酮的平均含量×100%。
7、2.5沙棘叶总黄酮提取工艺的确定2.5.1提取溶剂的选择取本品粗粉约2g,精密称定,分别用60%、70%、80%、90%的乙醇溶液、水、无水甲醇、丙酮等于80℃回流提取2次(每次2h),料液比第一次为12倍,第二次为12倍,其余按2.4项下操作,计算提取率。
8、2.5.2正交试验确定最佳提取条件为全面考察影响因素,设计了四因素三水平的正交试验。称取干燥药材粗粉2g于圆底烧瓶中,分别按正表2正交试验因素和水平水平A提取温度/℃B料液比(w/v)C提取骀旬沃啭时间/h1 60 1∶8,1∶8 2,22 70 1∶10,1∶10 2,2.53 80 1∶12,1∶12 2,3交设计的实验条件(表3)回流提取,过滤,用相应提取剂定容于100mL容量瓶中,然后取滤液3 mL到25 mL容量瓶中,按照中国药典05版一部沙棘含量测定项下测定总黄酮的含量并计算提取率。
9、提取完成。
