芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难。因此，用着色力强的染色剂（如孔雀石绿）在加热条件下进行染色时，染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染色的染料则难以透出，若再用复染液（如沙黄水溶液）染色后，芽孢仍然保留初染剂的颜色，而菌体被染成复染剂的颜色，即菌体和芽孢分别染成红色和绿色易于区分。
工具/原料
酒精灯、接种环、载玻片、炭疽芽胞杆菌、石炭酸复红染液、碱性美蓝染液、95%酒精等。
1.细菌涂片制备：
1、用炭疽芽胞杆菌斜面培养物涂片，干燥后经火焰固定。
2.细菌涂片染色：
1、（1）初染：于制好的涂片上滴加石炭酸复红染液，用微火加热，使染液冒蒸气（切勿煮沸），持续约5min，加热过程中要随时添加染液，勿让标本干涸，冷却后用水冲洗。
2、（2）脱色：用95%酒精脱色约1min，水洗。
3、（3）复染：加碱性美蓝染液染色1min，水洗，干后镜检。
4、结果观察：芽胞染成红色，菌体呈蓝色。
