1、使用前做好内、外检查，箱内如有他人存物，取出放好。试验开关、调温手柄等是否灵活好用。打开风顶(排气孔、，插好温度计。注意电源和铭牌上标称电压是否相符。箱壳要接好地线，以防漏电。
2、当箱内温度(由温度计读出、接近所需温度时，关掉辅助加热丝，只在主加热丝继续加热，箱内温度即将达到所需的温度时，反时针旋转调温旋钮使红灯刚灭，绿灯刚亮。待红绿灯自动交替明灭时，表示箱内温度已处在恒温状态。由温度计读数看是否为所需温度，如有偏差可稍调节调温旋钮。
3、通电后指示灯亮，如加热指示红灯不亮应将调温旋钮顺时针方向转动至红灯发亮。恒温箱如有辅助加热丝及鼓风马达，应将它们的开关都打开。若时间充裕，可关掉主加热丝以延长其使用寿命。
4、调温旋钮所指刻度并非箱内温度。每次恒温后可把恒温温度及旋钮所指刻度对应记录，以后使用时作为参考，可以节省时间。
5、使用完毕，关掉各个开关，并把调温旋钮反时针退回零位。要等箱内温度不很高时才可打开箱门，以防骤然降温造成玻璃门破裂。
6、当箱内温度稳定在所需要温度后放入待干燥或待培养(保温、样品。温度计指示最上层网架中心2/3面积的近似温度，所以样品尽量放在这个部位，其他层次和部位实际温度要偏高一些。
