药厂放行检测及方法验证用支原体qPCR检测试剂盒

 时间:2024-11-03 21:27:04

1、支原体核酸检测法(包括常规PCR和qPCR)以其检测时间短(仅需2-3小时)、灵敏度好和特异性高、操作简单而广受青睐。目前国内外药厂放行检测及方法验证(product release testing)采用的较多的是MB的:支原体qPCR检测试剂盒(经典法)和支原体常规PCR检测试剂盒(经典法)。其中,支原体qPCR检测试剂盒由于无须跑胶,且能定量,因而更受欢迎。

药厂放行检测及方法验证用支原体qPCR检测试剂盒

2、MB的支原体qPCR检测试剂盒(经典法)被称为支原体检测的金标准,主要基于以下几个原因:

3、遵循欧洲药典和日本药典要求。德国MB对该试剂盒进行了全面的验证,包括灵敏度、特异性和耐用性,并提供有验证报告,符合欧洲药典(EP 2.6.7)和日本药典(JP G3)规定,因而可替代传统的培养法和染色法。以灵敏度和特异性为例。

4、经典法qPCR试剂盒对以下欧洲药典规定的9种支原体的最低检测限均达到≤10CFU/ml

药厂放行检测及方法验证用支原体qPCR检测试剂盒

5、经典法qPCR试剂盒一次检测可涵盖所有可能污染细胞的支原体物种(涵盖欧洲药典规定的9种支原体),而对细菌和真核细胞DNA没有交叉反应(见下表)。

药厂放行检测及方法验证用支原体qPCR检测试剂盒

6、经典法qPCR试剂盒含qPCR mix、阳性支原体DNA对照、内控DNA对照,均为冻干粉,稳定性强,复溶后即可使用。内控DNA对照,可监测支原体DNA抽提过程,以及是否存在PCR抑制导致的假阴性。欧洲和日本药典要求核酸法需包括样品的DNA抽提,再行支原体检测。德国MB的支原体DNA提取试剂盒,具有极好的抽提效果,即使痕量支原体(如10CFU)提取DNA后也可检测出来。在用于工业放行检测时,经典法qPCR试剂盒与该试剂盒配合使用。

7、缔一生物总代理提供有全面的支原体标准品,用于支原体核酸法的方法验证。包括10CFU和100CFU支原体灵敏度标准品(用于灵敏度和耐用性验证)、支原体基因组DNA和细菌基因组DNA(10ng/管,用于特异性验证)、qPCR绝对定量标准品(1X108基因组拷贝,用于绘制标曲和绝对定量)。其中支原体灵敏度标准品还提供有GU:CFU比值(支原体基因组/菌落数比值),便于二者的换算。

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