1、首先,菌悬液的制备,取培养48h 生长丰满的枯草芽孢杆菌BF7658 斜面4~5 支,用10m左右大试管中,将试管在振荡混合器上振下,倒人一支无菌的无菌生理盐水将菌苔洗荡30s,以打散菌块。将上述菌液离心在3 000 x/min条件下,进行10 min,弃去上清液。用无菌生理盐水将用显微镜直接计数法计数,调整细胞浓度为菌体洗涤2~3次,制成菌悬液。
2、然后,进行平板制作,将淀粉琼脂培养基融化,倒平板27 套,凝固后待用。预热紫外灯,紫外线照射,将紫外线开关打开预热约20 min,使紫外线照射强度稳定。紫外灯功率为15W,照射距离为30cm。加菌液,取直径6.cm无菌平皿3 套,分别加人上述调整好细胞浓度的菌悬液3ml,并放人一根无菌搅拌棒或大头针。
3、然后,进行照射,将上述3套平皿先后置于磁力搅拌器上,打开磁力搅拌器开关,先照射1min,再打开皿盖,分别搅拌照射30S、1min和3min。盖上皿盖,关闭紫外灯。照射计时从开盖起至加盖止。操作者应戴上玻璃眼镜,以防紫外线伤眼睛。稀释菌液,稀释用10倍稀释法把经过照射的菌悬液在无菌水中稀释成10 ~ 10-6。
4、然后,进行涂布菌液,取10-*、10*和10-93 三个稀释度涂平板,每个稀释度涂3 套平板,每套平板加稀释菌液0.1ml,用无菌玻璃涂棒均匀地涂满整个平板表面。以同样的操作,取未经紫外线处理的菌液稀释涂平板作为对照。
5、然后,从紫外线照射材料开始,直到徐布完平板的几个操作步骤都需在红灯F讲行 紫外帧霭绎郎线对枯草芽孢杆菌芽孢杆菌BF7658斜面4~5支,用10m左右菌悬液的制备,进的1取培养48h生长丰满的枯草大试管中。将试管在振荡混合器上振下,倒人一支无菌的无菌生理盐水将菌苔洗荡30s,以打散菌块,10min,弃去上清液。用无菌生理盐水将2将上述菌液离心3000x/min,用显微镜直接计数法计数,调整细胞浓度为菌体洗涤2~3次,制成菌悬液。
6、然后,将淀粉琼脂培养基融化,倒平板27 套,凝固后待用。紫外线照射将紫外线开关龅歧仲半打开预热约20 min,使紫外线照射强度稳预热紫外灯定。紫外灯功率为15W,照射距离为30cm。取直径6.cm无菌平皿3 套,分别加人上述调整好细胞浓度的2加菌液菌悬液3ml,并放人一根无菌搅拌棒或大头针。将上述3套平皿先后置于磁力搅拌器上,打开磁力搅拌器开3照射关,先照射1min,再打开皿盖,分别搅拌照射30S、1min和3min。盖上皿盖,关闭紫外灯。照射计时从开盖起至加盖止。操作者应戴上玻璃眼镜,以防紫外线伤眼睛。
7、最后,稀释菌液用10倍稀释法把经过照射的菌悬液在无菌水中稀释成1稀释10 ~ 10-6。取10-*、10*和10-93 三个稀释度涂平板,每个稀释度涂3 套2涂布菌液平板,每套平板加稀释菌液0.1ml,用无菌玻璃涂棒均匀地涂满整个平板表面。以同样的操作,取未经紫外线处理的菌液稀释涂平板作为对照。