1、蛋白质抽提实验对象为组织样品，取适量(250~500mg)新鲜组织样品或正确保存的组织样弗辞肛胰品，加1ml眉鹆庞卯含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)，匀浆后抽提总蛋白(或核蛋白)。实验对象为细胞样品，每份样品取1×106~1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂(或核蛋白抽提试剂)抽提总蛋白(或核蛋白)。
2、蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。
3、变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳(SDS-PAGE)：将准备好的样品液和预染蛋白marker分别上样，标准加进第一个孔中，电泳分离蛋白。
4、蛋白质转移到PVDF膜，按Bio-Rad蛋白转移装置说明组装滤纸凝胶纤维素夹层，30mA恒流条件下，4°C转移过夜。
5、western blot膜的封闭和抗体孵育膜在5%脱脂奶粉溶液中室温孵育1小时以封闭膜上的非特异结合。封闭过的膜加入一抗室温孵育1.5小时，抗原抗体结合。加入HRP标记的二抗体以结合一抗，室温孵育膜1小时。加入HRP标记的GAPDH抗 体可同时检测GAPDH含量。
6、western blot结果检测：化学发光法检测，膜与化学发光底物孵育，经X胶片曝光显 影。图片扫描保存为电脑文件，并用GIS1000分析软件将图片上每个特异条带灰度值的数字化。
7、western blot数据分析：目的蛋白的灰度值除以内参GAPDH/Actin的灰度值以校正误差，所得结果代表某样品的目的蛋白相对含量。
8、提供实验报告，包括详细的实验方法及免疫印迹实验结果的相关数据。
