1、一、要摘除眼球，不摘除晶体。否则在脱水时眼球非常容易塌陷，角膜和视网膜贴在一起。有一小鼠眼球石蜡切片的protocol：1、固定液：70%乙醇100ml、冰醋酸5ml、40%甲醛10ml固定24小时，在70%乙醇100ml中保存。2、组织处理：65% 乙醇1X1h、80%乙醇2X1h、95%乙醇1X1h、100%乙醇3X1h二甲苯3X1h、浸蜡 4X1h，包埋。3、切片：28%氨水3-4滴，冰上15min。4、标准HE染色。注意：一般来说，小鼠可以不灌注，直接将眼球取出后，用手术刀在角巩膜缘处开两个窗，投入4%多聚甲醛中，4C固定约1hr，待组织稍硬后取出晶体，再将后节继续固定约2hr。如果做冰冻切片，固定时间可以缩短，在OCT包埋之前，先在30%蔗糖中4C放置过夜，再包埋切片。
2、关于冰冻切片固定的问题，第一：肯定是要固定的，区别在于固定的时间以及固定前后的处理。第二：我们这里主要做心肌组织。我就以心肌组织为例把我知道的简单说下：第一种：.取材后先放到4%多聚甲醛3-4h，然后流水冲洗，蔗糖沉底，然后再放到-80度进行保存，需要切片的时候取出，片子粘好后不做任何处理，直接放到-80度保存备用。第二种：取材后不做任何处理直接放到-80度，需要切片的时候取出，片子粘好后用冷丙酮固定5-10分钟，风干后-80度保存备用。第三种：.Frozen sections: Once mounted on APES coated slides, frozen sections are best kept at -80!aC until neeed.1. When required, leave to warm at room temperature for 5 min.2. Pre-cool the fixative (acetone, methanol or ethanol) (Abcam recommends starting with acetone) at -20度 for 30 min.3. Fix with the pre-cooled fixative for 5 -10 min, at room temperature4. Rinse 3-4 X in PBS.5. Continue with the immunohistochemical staining protocol.第一种和第二种我们这里都有人做过，而且都有结果。第三种我没有见过，是abcam抗体公司提供的IHC-Fr的protocol中的操作步骤。仅供参考，具体的固定方式还要看你的实验要求，要具体问题具体分析，good luck ！
