1、血浆胰岛素测定 低血糖发作时，应同时测定血浆葡萄糖、胰岛素和C 肽水平，以证实有无胰岛素和C 肽不适当分泌过多。血糖<2.8mmol/L 时相应的胰岛素浓度≥36pmol/L(6mU/L)（放射免疫法，灵敏度为5mU/L）或胰岛素浓度≥18pmol/L(3mU/L)
2、低血糖典型表现（Whipple 三联征） 可确定：①低血糖症状；②发作时血糖低于2.8mmol/L;③供糖后低血糖症状迅速缓解。少数空腹血糖降低不明显或处于非发作期的患者，应多次检测有无空腹或吸收后低血糖，必要时采用48～72 小时禁食试验。
3、胰岛素释放指数 为血浆胰岛素(mU/L)与同一血标本测定的血糖值(mg/dl)之比。正常人该比值<0.3，多数胰岛素瘤患者>0.4，甚至1.0 以上；血糖不低时此值>0.3 无临床意义。
4、血浆胰岛素原和C 肽测定 参考Marks 和Teale 诊断标准：血糖<3. 0mmol/L，C- 肽>300pmol/L，胰岛素原>20pmol/L，应考虑胰岛素瘤。胰岛素瘤患者血浆胰岛素原比总胰岛素值应大于20%，可达30%～90%，说明胰岛素瘤可分泌较多胰岛素原。
5、48～72 小时饥饿试验 少数未觉察的低血糖或处于非发作期以及高度怀疑胰岛素瘤的患者应在严密观察下进行，试验期应鼓励患者活动。开始前取血标本测血糖、胰岛素、C 肽，之后每6 小时一次，若血糖≤3. 3mmol/L 时，应改为每1～2 小时一次；血糖<2.8mmol/L 且患者出现低血糖症状时结束试验。
6、延长（5 小时）口服葡萄糖耐量试验 主要用于鉴别2 型糖尿病早期出现的餐后晚发性低血糖症。方法：口服75g 葡萄糖，测定服糖前、服糖后30 分钟、1 小时、2 小时、3 小时、4小时和5 小时的血糖、胰岛素和C 肽。
