1、第一步:制备检测样品,在实验室按照无菌流程操作规范取待检样品(若是待检为固体样品则需要研磨)制成1:10样品混悬液(无菌水配制而成一般为25g(ml),加225ml无菌水)。需要计数检验时,进行稀释(可以以10倍递增稀释)。
2、第二步:菌种分离及培养,吸取5 mL混悬液,接种于7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50 mL培养基内,36℃±1℃培养24 h,转种血平板和Baird-Parker平板, 36℃±1℃培养24 h,挑取血平板上金黄色(有时为白色)菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。
3、第三步:血浆凝固酶试验,吸取1:4新鲜兔血浆0.5 mL,放入小试管中,再加入培养24 h的金黄色葡萄球菌楱诼垂柳肉浸液肉汤培养物0.5 mL,振荡摇匀,置 36±1℃温箱或水浴内,每半小时观察一次,观察6 h,如呈现凝固,即将试管倒置或 倾斜时,呈现凝块者,被认为阳性结果。同时以已知阳性和阴性葡萄球菌株及肉汤作为对照。
4、第四步:金黄色葡萄球菌快速检测方法,利用法国梅里埃公司生产的RPF培养基、API检测系统等。利用荧光免疫的方法检测葡萄球菌肠毒素,在仪器上45min可以得到结果。
5、第五步:动物学试验检测金黄色葡萄球菌肠毒素,主要利用幼猫和猴。
6、第六步:血清学试验,肠毒素作为抗原,可以和特异性抗体发生结合性反应,产生可见沉淀。用血清学反应检验金黄色葡萄球菌肠毒素。
7、请大家多多支持。