1、将双歧杆菌接种于MRS肉汤培养基，活化三次后离心(4000r，15min)弃去上清液得菌泥，洗涤后与0.85%-0.9%无菌生理盐水混合配制成一定浓度的菌悬液以备使用。
2、配制浓度（1%-3%）且含益生元量为（3%-9%）的海藻酸钠溶液，110℃，灭菌15min。制备除氧剂，配制除氧剂的浓溶液，过滤除菌以备使用。将菌悬液和含有益生元的海藻酸钠溶液按照1：（5-20）的比例混合，除氧剂按照菌胶液总量的0.03%～0.09%的添加量加入，并在旋涡混合仪上混合均匀得菌胶液。
3、用压力喷嘴将上述菌胶混合液逐滴滴入大豆油中（含0.4%的吐温-80），菌胶液和大豆飒蛏擢墟油的比例为1：（4-7），用磁力搅拌器搅拌800rpm/min，乳化（5-20min），然后快速加入浓度为1%-3%的氯化钙溶液，静置30min。倾去上层大豆油，通过离心得到湿胶囊(1000r，5min)，用生理盐水洗涤3次。
4、配制含1%-3%壳聚糖、含1%-5%瓜尔胶的混合溶液，灭菌（110℃，10min）。将单层包埋的双歧杆菌微胶囊与壳聚糖-瓜尔胶混合溶液按质量体积比1:（5-20）的比例混合，搅拌均匀，制成双层包埋的双歧杆菌微胶囊。
5、将棕榈油加入0.4%的吐温-80后（110℃，10min）。然后将制得的双层双歧杆菌微胶囊与棕榈油按质量体积比1：（10-20）的比例混合，搅拌均匀，制成三层包埋的双歧杆菌微胶囊，离心收集。
