1、首先，寻找目标circRNA的序列。circbase网站是常用的circRNA查询网站。打开网站后，在搜索框中输入circRNA ID，记得前边加上物种 （如人：hsa）。
2、然后，搜索后可以看到circRNA相关信息。 点击最右方的fasta, 查找circRNA的fasta格式文件。
3、点击 “spliced”,得到circRNA的拼接序列。点击“search”,下载得到txt格式的文件，写字本打开后，可以看到circRNA序列。
4、接着，将序列复制到word文档中，找到前段1猱蝰逾鸾50bp序列（如图：黄色）和后段150bp序列（如图：红色）。将后段150bp序列放到前段150bp序列前方，如图所示，得到新得一段300bp序列。
5、设计引物。使用NCBI设计引物粘贴序列后，将PCR产物长度改为70~150. 其他不需要更改。点击“get primers”.
6、等待一分钟左右。网站分析得到很多引物，一般选取第一个。注意，引物扩增得到的片段必须包含150bp处的位点。可以将引物在NCBI中blast，查看引物的特异性。
7、一般多选取几个引物对进行实验。
