1、试验前准备试验前要准备好操作HI试验的所有材料，包括待检测的血清、标准阴性血清和阳性血清、PBS缓冲液、1%鸡红细胞（具体制作可参见本编经验“1%鸡红细胞制备方法”）、96孔血凝板、移液器及吸头等等。
2、测定抗原HA效价HA即血凝试验，是进行HI试验必须具备的步骤。首先要测定所使用抗原的血凝价，便于后续配置四单位抗原。
3、四单位抗原的配置及验证测定好抗原的血凝价后，就可配置四单位抗原了。配置好后，要对四单位抗原进行验证，确保配置的精确性。
4、倍比稀释待检血清首先在96孔血凝板内加入PBS，每孔25微升，然后在第一纵排标记样品序号“1、2、3.....6”，第7横排设为阴性血清对照，第8横排设为阳性血清对照。然后用八道移液器反复吹打第1竖排孔，约8下左右，吸取25微升加入第2竖排，再吹打稀释，吸取25微升加入第3竖排，以此类推，直至最后一孔，吸取25微升弃去，至此，血清倍比稀释完毕。
5、加四单位抗原在稀释好的板内，每孔加入25微升验证好的四单位抗原液，注意加的时候尽量从最后一竖排往前加，即从低浓度到高浓度，保证不污染孔。
6、抗原抗体作用加入抗原后，血清中的抗体即与抗原发生作用，25℃作用20分钟即可，若有抗体，则抗体与抗原结合，抗原就不能与红细胞结合。
7、加1%鸡红细胞抗体抗原作用完毕后，就可以加1%鸡红细胞了，每孔25微升，注意加的时候吸头尽量垂直于血凝板，在其上方0.5cm处，以免造成污染。
8、继续作用20min加完红细胞后，整个体系还要作用20min，此时，红细胞会与未被结合的抗原发生结合，出现凝集现象。
9、读取结果作用完毕后，就可以读取结果了，要将血凝板竖起来，在背面读数，以红细胞能完全流下来的孔作为血清的HI滴度，前提阴性阳性血清需成立，即阴性血清孔出现完全凝集，阳性血清滴度与标注的相差1个滴度以内。
