用Trizol法从组织中提取总RNA的具体方法

 时间:2024-10-15 14:00:36

1、首先,将组织块直接放入研钵中,加入少量的液氮,迅速研磨,待组织变软,再加入少量的液氮,再研磨,重复三次。

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2、然后,将组织样品按50-100mg加入1mlTrizol,转移入离心管。另外组皮辚别邦织体积不能超过Trizol体积的10%,再用电动均浆器充分均浆1-2min。

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3、然后,在12000r/min下离心五分钟,弃沉淀,按每毫升Trizol加入200微升的氯仿,盖紧离心管,用手振荡混匀15s,室温放置十分钟。

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4、然后,在四摄氏度12000g离心十五分钟,吸取上层水相,移至另一新的离心管中,岳蘖氽颐按每毫升Trizol加入0.6ml异戊醇,混匀放置室温5-10min。

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5、然后,在四摄氏度12000g离心十分钟,弃上清液,按每毫升Trizol加入1ml的75%乙醇,温和振荡,悬浮沉淀。

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6、然后,在室温晾干或真空干燥5-10min,再测260nm下吸光值定量RNA浓度。

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7、最后,RNA可进行mRNA分离,或储存于70%乙醇中并保存于-70摄氏度下,加氯仿前的均浆液可以保存一个月以上。

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