哪些因素会造成Western Blot发光时发生荧光“淬灭”?
哪些因素会造成Western Blot(enlight)发光时发生荧光“淬灭”?
1、抗体浓度太高,局部过多的HRP会快速消耗底物,导致荧光信号过强,条带呈灼烧样。可降低抗体上样量。
2、抗体浓度太低,荧光信号太弱,可能第一次压片能够获得很弱的条带,再压片就没有什么条带都没有。
3、操作时间过长,膜逐渐干掉。减少操作时间,避免膜干掉。
4、不良的实验习惯导致设备或试剂籀憨瘵廿污染。例如铁锈和不慎沾染的显影液、定影液,会造成荧光淬灭,甚至直接导致无荧光;
5、ECL发光液的质量。除过氧化物因接触空气被逐劭瞒岙鹭渐还原外,ECL发光液的成分通常都不稳定。建议选择发光稳定的发光液。