间充质干细胞培养时细弯挖峒擘胞经过冻存后再拿出来继续培养时需要进行复苏才可以正常培养，复苏细胞时需要注意以下几个要点及操作细节，狡掇鹚檗忽略这些关键步骤就很容易导致细胞在复苏时受损死亡。
1.准备37°C水浴和预热到 37°C 的完全培养液；准备好一个15ml 的离心管，同时加入9ml 的完全培养液；
2.准备好这些后，将细胞从液氮中取出，放入到水浴锅中，同时轻轻摇动，保证细胞能够在3min 内完全溶解，同时应该注意不要把冻存管的管口没入水浴中（可能由水引起污染）。 注意要点：溶解的时间过长会影响细胞的活力，导致死细胞多，细胞状态差；如果从液氮中取出，管内有少量液氮要先-80℃放置10-30 分钟，使液氮完全挥发再复苏，避免危险。
3.溶解完全的细胞要快速转移到无菌超净台中，用 75％酒精棉球擦外表面。用吸管将冻存管中细胞悬液吸到15ml 的含有培养液的离心管中，同时用培养液洗2 次冻存管，一起加到离心管中吹匀，避免产生泡沫。 注意要点：细胞吸出后，用培养液再洗 2 次冻存管，把细胞全部转移，否则会损失细胞。吹匀时如果很多泡沫会影响细胞活力，导致复苏后死细胞偏多。
4.250 g 离心 5 minutes；弃上清液，加入2-3ml 预热的完全培养基，轻轻吹匀，保证细胞完全重悬。 注意要点：离心的作用是去除细胞冻存液中DMSO 对细胞的影响，否则会导致干细胞分化。重悬务必保证所有的细胞均匀分开，否则会导致细胞成团或者细胞还在贴在底部，损失细胞。去除上清时，要小心（特别是使用5-10ml 移液管）避免将细胞吸走，导致细胞数损失，操作熟练的人员，可以直接倒去上清。
5.将重悬的细胞接种到T25 或者是T75 的培养瓶中，加入适量的培养液，再把细胞摇均匀，放入37°C 、5% CO2 培养箱中。注意要点：接种到T25 可以比较安全的复苏，推荐新手操作。这样必须在 24-48 小时后传代。摇匀时要左右轻轻摇动，保证所有的细胞能够均匀的分布。
6.第二天进行换液，保证去除死细胞。正常的培养过程是三天进行一次换液，如果细胞长到有80-90 ％汇合进行传代。
另外还需要注意的是，第二天换液时应当去除死细胞这样就可以减少对正常细胞的影响，正常复苏细胞时也会产生少量的死细胞因此这一点不需要格外担心。细胞培养融合率在80%-90%时就应该进行传代培养，不然就会因接触抑制而影响细胞状态以及导致细胞消化成团。