在进行CIK细胞培养张虢咆噘时首先需要获得单个核细胞，我们通常获得单个核细胞会有两种渠道，一种是脐带血中获得，另一种则是在外周血中获得。在提取单个核细胞时也是有两种常用的方法，擒歙常泺那就是ficoll密度梯度离心法与羟乙基淀粉密度梯度离心法，这两种方法的该如何操作呢？下面就来介绍这两种方法的操作过程。
ficoll密度梯度离心法：
1.将脐血/外周血与生理盐水按照1:1的比例进行完全的混合；
2.取无菌离心管先加入1/3的ficoll分离液，然后在加入2/3的脐血/外周血稀释液，室温、2000r/mim，离心20分钟；
3.离心完毕后取出离心管，用吸管把分离层中白色雾状的单个核细胞吸出；
4.取出单个核细胞后用生理盐水洗涤三次进行细胞计数；
5.按照初始细胞浓度为1×106/ml接种到RPMI1640培养基中；
6.接种后在细胞中加入1000U/ml重组人IFN-γ然后放入培养箱中37℃二氧化碳浓度5%环境中培养一天；
7.培养24小时后加入50μg/mlCD3单克隆抗体、300U/ml重组人IL-2、100U/ml重组人IL-1α然后继续培养；
8.随后的按照没1-3天更换培养基和重组人IL-2，大约2周后便可以得到CIK细胞成品；
9.通常CIK细胞培养至22天左右时生长趋势会达到顶峰最高增殖可以达到20-40倍但是如果采用济南中赛生物的CIK培养方法配合CIK细胞处理试剂盒培养出的细胞最高增殖可以达到100倍。
羟乙基淀粉密度梯度离心法 ：
1.将将脐血/外周血与生理盐水按照1:1的比例进行完全的混合；
2.去无菌离心管首先加入1/3的羟乙基淀粉分离液，然后加入2/3的脐血/外周血稀释液，室温、2000r/m、离心20分钟
3.离心结束后，用吸管把分离层中白色雾状的单个核细胞吸出；
4.取出单个核细胞后用生理盐水洗涤三次进行细胞计数；
5.按照初始细胞浓度为1×106/ml接种到RPMI1640培养基中；
6.在培养2~3周后便可以获得成品CIK细胞。
