1、首先,取新鲜豌豆叶片,放于用液氮预冷的研钵中研磨,要尽量细。
2、然后,取0.3 g 材料放于1.5 ml Eppendorf管中,加人600 pl 提取液,65C保温10 min。再以8 000 r/min 的转速离心10 min,取上清液。
3、然后,加入600 pl 氯仿,振荡,以13 000 r/min 的转速离心5 min。取上清液,加人2 倍体积的预冷的无水乙醇,再轻轻地颠倒混匀。
4、然后,在以13 000 r/min 的转速离心10 min。弃去上清液,用70%(V/V)乙醇洗涤沉淀两次,在室温风下干。
5、然后,将沉淀溶于30 pl 灭菌的双蒸水中,取10 ug植物基因组DNA,用10U特定限制性内切酶,37C消化8~12 h。
6、最后,在0.7%(V/V)的琼脂糖凝胶(含0.5 ug/ml溴化乙啶),恒压电泳(电压<5 V,/cm),检测基因组DNA 及酶切情况。