多肽的荧光标记技术(FITC修饰/AMC修饰)

 时间:2024-10-12 06:05:25

1、下面是一些常用的多肽修饰荧光物质:

多肽的荧光标记技术(FITC修饰/AMC修饰)

2、下面是一些荧光物质的激发光波长和发射光波长

多肽的荧光标记技术(FITC修饰/AMC修饰)

3、 FITC修饰异硫氰酸荧光素(FITC)具有比较高的活性,通常来说,在固相合成过程中引入该种荧光基团相对于其他荧光素要更容易,并且反应过程中不需要加入活化试剂。我们公司合成的FITC修饰的多肽通常主要有两种形式:(1)在整条肽链末端接入FITC,并且在FITC之前接入一分子的Acp(6-氨基己酸),也称烷基间隔器。反应中FITC与肽链上裸露的-NH2反应,Acp的接入提供了六个碳的直链空间,大大降低了反应的空间位阻,提高了反应效率,降低了反应难度。其次,FITC还与多肽结构中的-SH,侧链-NH2反应,Acp的加入也降低了这种副反应发生的可能。此外,多肽在酸性环境条件下切割时,在N端接入FITC的多肽需要经历环化作用来形成荧光素,这种过程通常都会伴随最后一个氨基酸的切除,而烷基间隔器Acp的接入就避免了这一情况的发生。(2)在整条肽中的某个Lys侧链接入FITC,Lys侧链为末端为-NH2的四碳直链烷基,直接起到了降低空间位阻的作用。这种修饰方式能够灵活的在整条肽中任何位置进行FITC修饰,而不仅仅局限于末端。我们所采用的FITC修饰多肽的两种形式,都具有操作简便,成功率高,容易分离纯化等优点。

多肽的荧光标记技术(FITC修饰/AMC修饰)

4、 AMC修饰7-氨基-4-甲基香豆素(AMC)是一种应用广泛的荧光标记试剂,例如,酶的痕量测定,酶的鉴定,激光染料的制备等多种用途,此外,C端用香豆素修饰的泛素分子也是研究蛋白质泛素化过程的重要探针。与其他荧光染料不同的是,AMC修饰多肽分子是从C端进行:(1)AMC与肽链C端第一个氨基酸反应;(2)固相合成整条肽链(从第二个氨基酸开始),并且保留整条肽链的侧链保护基和最后一个氨基保护基;(3)液相缩合AA-AMC与全保护的肽链;(4)切除保护基,完成肽链的修饰。

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