1、准备好取水点所用三角瓶,经高温(250℃,0.5h)灭菌。
2、镊子经铝箔纸包装后,经高温(250℃,0.5h)灭菌。
3、配制需求量的R2A培养基和缓冲液(可以选用0.9%氯化钠溶液或pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液),经高压蒸汽灭菌(121℃,15min)。
4、包装好过滤装置,经高压蒸汽灭菌(121℃,15min)。如果不放心可以选用高异鲢阍羟压蒸汽灭菌(121℃,30min)。注:这样更安全一些,避免阴性对照长菌。
5、进行试验,首先将R2A培养基倾倒在一次性培养皿上,待凝固,备用。
6、取1ml各取水点的水加入至事先称好的灭菌缓冲液(体积大小可以自己选用,因为是薄膜过滤法,溶液全部经过滤膜,所以选用一个操作方便的体积即可)中,过滤。然后用100ml缓冲液冲洗滤膜3次。
7、取出滤膜,平放在培养基上,轻轻将气泡赶出。注:一般一个取水点至少做2个皿。阴性对照可直接加入同体积的缓冲液,其余同步骤6