制备少量的细菌基因组DNA(上)的具体步骤

 时间:2024-10-13 04:09:57

1、首先,从平板培养基上挑选单菌落接种到五毫升的液体LB培养基中,适当温度条件下,震荡培养过夜。

制备少量的细菌基因组DNA(上)的具体步骤

2、然后,取出菌液0.5-1.0毫升于Eppendorf管中,在12000r/min速度下离心一分钟,然后去除上清液。

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3、然后,加入一百微升的GTE溶液,在旋涡混合器上震荡混匀至沉淀彻底分散,再加入五百微升的GTE溶液,震荡混匀。

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4、然后,向悬液中加入六微升的一百毫克每毫升的溶菌酶至终质量浓度为一毫克每毫升,然后混匀,在三十七摄氏度的温度下加热三十分钟。

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5、然后,再向悬液中加入六微升的蛋白酶K一百毫克每毫升,直至终质量浓度为0.1mg/mL,然后混匀,在55摄氏度下继续温浴一小时,中间轻缓颠倒微量离心管数次。

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6、最后,在温浴结束后向溶液中加入等体娑授赔那积(600微升)的酚/氯仿/异戊醇溶液,上下颠倒充分混匀,在12000r/min速度下离心五分钟,将上清液移至新的离心管中,然后再用酚/氯仿/异戊醇溶液抽提一次。

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