1、BIOGHSC Super Probe Master Mix包含dNTP Mix、Mg2+、BIOG热启动聚合酶、荧光保护素。
2、一般来说反应体系中引物终浓度为0.2μM可得到较好的扩增效果。当反应结果不理想时,可以在0.1-1.0μM范围内调整引物浓度。
3、探针终浓度可以在0.15μM-0.30μM之间调整。4、qPCR反应灵敏性高,模板量的准确性对结果影响很大,建议将模板适度稀释后加入,或用50ul反应体系。
4、模板体积最好不超过反应体积的10%,操作尽量在超净台中进行,以防气溶胶污染。6、扩增产物长度请选择在100bp-500bp范围内,最好为100-200bp。
5、配制反应体系时,避免震荡混匀,以防气泡产生。8、反应条件:95℃加热6-10分钟,以激活热启动DNA聚合酶,然后95℃ 5-15秒,60℃ 30-35秒,35-40个循环。反应条件可根据目标片段的大小、引物的Tm值等适当调整。