1、首先得下载安装一个primer5 的软件，网上百度搜索后即可下载获得
2、点击File下拉菜单，选择New，然后选择DNA Sequence
3、从word文件中copy目标序列，然后control+V到primer5的文本框中，选择As is，点击OK。
4、设计引物前得进行酶切位点分析，所以要点击Enzyme按钮，选择Add添加目标酶，然后点击OK进行分析检测
5、完成上面之后，我们开始点击primer选项设计引物
6、点击S/A，分别代表设计上游/下游引物，这里我们就点击S为例来设计上游引物
7、设计好之后往往需要根据作者的需要进行编辑，这时就点击Edit primers，然后出现以下界面，作者就可以进行编辑修改了，这样就基本完成获得你所需要的引物了
