酶切污僻莆姆产物电泳图长条带和半圆形条带的区别:含义不同,性质不同。
1、性质不同:如果是单酶切,超脐殊盥倜螺旋质粒会变成开链DNA,开链的DNA在凝胶中泳动速度慢于超螺旋质粒,因此条带会偏大,这是酶切充分的情况。如果不充分,就会有大小有差距的几条带;如果是双酶切,而且片段大小适中,可以看见酶切的片段和载体,还有未切开的质粒。
2、含义不同:能不能区分超螺旋质粒和开链质粒,和所用琼脂糖凝胶的浓度,电泳时间,DNA纯度有关。试着延长跑胶的时间,应当是有区别的。酶切之前就有几条带,可能是因为质粒样品中有杂带,来源于杂菌或者降解。
DNA的限制性内切酶酶切分析
限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子,然后从底物上解离。