分离核糖体的实验步骤

 时间:2024-10-14 02:11:27

1、为从剩余的细胞组分中分什置葆鸳离核糖体,将不含细胞碎片的粗制裂解液以1:1的比例铺到1.1 mol/L的蔗糖溶液之上,于 4℃ 在Beckinan 50.2 Ti 恒定角度转头中离心,这一过程包括长时间的离心以使70S核糖体沉降,同时分离30S和50S核糖体亚基,较低的离心速度用于初步将70S核糖体沉淀出来,而50S或30S亚基则不沉淀。

分离核糖体的实验步骤

2、以100000g离心16小时来沉降70S核糖体,可以更换蔗糖铺垫液2至3次直到获得干净的沉淀物,对于产甲烷菌、盐杆菌及硫代谢嗜热菌,至少应用高盐溶液洗两次以确保将非核糖体沉淀去除掉。

分离核糖体的实验步骤

3、以100000g离心24小时,沉淀中含有多核糖体,可贮存于 -80℃ 中,以150000g离心3小时,用重悬缓冲液洗沉淀物,然后悬于200μl重悬缓冲液中。

分离核糖体的实验步骤

4、以55000g离心12小时,为除去蔗糖,用不含蔗糖的上述缓冲液漂洗并将沉淀重悬,然后于4℃以10000g离心10分钟使悬液澄清,将含有核糖体的沉淀贮存于-80℃。

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