1、无菌条件下,2ml/孔细胞(5×105cells/ml)种入6孔板,室温孵育1h使其贴壁,孵育后镜检其贴壁程度;
2、将4% agarose gel放入70℃水浴锅融解,空100ml无菌瓶与2×Grace放入40℃水浴锅预热;
3、将杆状病毒用无血清supplemented Grace梯度稀释:10-1~10-8。
4、弃6孔板内上清,快速加入稀释好的病毒,1ml/孔,复孔,室温孵育1h。
5、配置上层琼脂:加20ml高温灭活FBS到2×Grace 100ml,25ml 2×Grace钱砀渝测(含FBS) 12.5罪焐芡拂ml 无菌水 12.5ml 4% agarose gel,至预热的100ml无菌瓶,轻轻混匀,放入37℃水浴锅备用;
6、弃6孔板内上清,快速加2ml上层琼脂,以防菌层干燥,静置10-20min使其凝固;
7、将6孔板放入27℃培养箱,培养4-10天;
8、计数板中噬菌斑,直至连续两天无变化,加1mg/ml中性红0.5ml,室温孵育2h后计数噬菌斑。