通常用两种方法：
1、测交法：杂种F1与隐性类型杂交，若后代出现两种基因型与表现型的个体，证明了杂种F1产生了两种配子，即等位断芡闽彝基因彼此分离。
杂种F1与双隐性类型杂交，若后代出现四种基因型与表现型的个体，证明了杂种F1产生了四种配子，即等位基因彼此分离的同时非同源染色体的非等位基因自由组合。
2、自交法：杂种F1自交后代F2中出现显隐性两种表现型的个体，也是由于F1产生了两种配子，即等位基因彼此分离。无论是自交法还是测交法，其本质都是测定杂合体F1代产生配子的种类和比例。
植物常用自交法进行验证，根据一对相对性状遗传实验的结果，若杂合子自交后代表现型比例为3：1，则该性状的遗传符合分离定律，根据两对相对性状遗传实验结果，若杂合子自交后代表现型比例为9：3：3：1，则两对性状遗传符合自由组合定律。
采用测交法进行验证时，若杂合子测交后代两种表现型比例为1：1，则该性状遗传符合分离定律，若双杂合子测交后代出现四种表现型比例为1：1：1：1，则两对性状的遗传符合分离定律。
